[目的] 了解白蜡虫泌蜡高峰期所表达的热激蛋白及其序列特征。[方法] 从白蜡虫转录组数据库筛选获得hsp10、hsp20、hsp40、hsp60、hsp70、hsp90基因序列，进行序列联配和进化树分析，并对hsp40、hsp60、hsp90基因在不同温度下mRNA相对表达量情况进行荧光定量PCR检测。[结果] 从白蜡虫转录组数据库中共筛选出32条hsp基因序列，序列分析发现它们与目前已报道的序列具有很高一致性，大部分含有保守区域和特征序列，能够与同目昆虫基因聚为一支。hsp40、hsp60、hsp90基因均能被温度诱导。[结论] 在白蜡虫泌蜡高峰期共鉴定到32个热激蛋白非重复序列基因（unigene）：hsp10 unigene 3个，hsp20 unigene 1个，hsp40 unigene 11个，hsp60 unigene 1个，hsp70 unigene 13个，hsp90 unigene 3个。

[目的]本研究欲利用Bac-to-Bac表达系统,在Sf9细胞中表达WS.[方法]将WS编码序列克隆到质粒pFastBacTMHT B后,转化大肠杆菌DH10BacTM,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid/EpelWS.将rBacmid/EpelWS转染Sf9细胞.[结果]免疫荧光标记检测表明:WS在受感染细胞的细胞质中表达.[结论]本研究成功表达了白蜡虫WS,为白蜡虫WS的生化特性研究奠定了基础.

［目的］ 本研究旨在获得白蜡虫蜡酯合酶（wax synthase，WS）基因cDNA全长，并在大肠杆菌中表达，为后续功能研究奠定基础。［方法］ 采用Rapid Amplification of cDNA End（RACE）技术扩增ws基因3'及5'末端序列，在获得ws基因cDNA全长的基础上，构建原核表达载体，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达白蜡虫WS。［结果］ 序列分析表明，白蜡虫ws基因cDNA全长 1518bp，ws基因开放阅读框1356bp，5'端非编码区94bp，3'端非编码区68bp，编码452个氨基酸，预测蛋白质分子量为51.8kDa，等电点为6.35。Western Blot检测表明目的蛋白在大肠杆菌中表达。［结论］ 本研究获得了白蜡虫cDNA全长，并在大肠杆菌中成功表达，为其它昆虫蜡酯合成研究提供了参考。

对昆明地区白蜡虫不同虫态的过冷却点进行了测定,结果表明:昆明地区雄虫真蛹期过冷却点最低,中值为-15.81 ℃,符合正态分布;雌虫越冬时期过冷却点最低,中值为-20.41 ℃,符合正态分布;对于不同地理种群白蜡虫越冬雌成虫过冷却点的测定表明,长春地区越冬雌成虫在3月份过冷却点显著低于其它地区,过冷却点中值为-23.19 ℃,不符合正态分布。测定结果表明:白蜡虫在严寒地区抗寒能力增强。

采用Wolbachia的通用引物、A大组和B大组的特异性引物对一种新的白蜡虫寄生蜂——长尾啮小蜂(Aprostocetus sp.)体内Wolbachia的wsp基因进行分子检测,所获得的基因片段分别命名为wApr、wAprA和wAprB,长度分别为620、566和463 bp;基因序列分析表明:wAprA、wAprB与wApr在对应位置序列仅有4个碱基的差异。系统发育分析表明:该寄生蜂仅感染了B大组Dig亚组的Wolbachia。wApr和wAprB基因序列已经递交到NCBI,登录号分别是HQ121415和HQ121417。

采用Wolbachia的通用引物对白蜡虫优势寄生蜂之一,白蜡虫阔柄跳小蜂(Metaphycus ericeri Xu et Jiang)体内Wolbachia的wsp基因进行PCR扩增,以此为模板结合Wolbachia的A大组和B大组的特异性引物进行巢式PCR扩增,结果表明:白蜡虫阔柄跳小蜂被A大组和B大组Wolbachia复合感染,将两种寄生蜂感染的A大组和B大组Wolbachia基因片段以及采用通用引物获得的基因片段分别命名为wMeeriA 、wMeeriB和wMeeri,对应的片段长度分别为554、439、599 bp。系统发育分析表明:白蜡虫阔柄跳小蜂感染的Wolbachia分属于A大组以及B大组的Con亚组。所获得的序列已经递交到NCBI,登录号分别为:HQ161162、HQ161163和HQ161164。

To understand the diversity of the gut microbes of Chinese white wax scale Ericerus pela, 16S rDNA clone library was constructed to analyze the gut microbes of the female E. pela adults. The results showed that, the gut of E. pela contained abundant of Rickettsia. Gut microbes Arsenophonus and Variovorax were also been identified. And Rickettsia was the main bacteria in gut of E. pela. The phylogenetic analysis of the 16S rDNA showed that, the Rickettsia from E.pela has close relationship with that of pea aphid Acyrthosiphon pisum. PCR amplification was performed using the specific primers for Rickettsia to detect infection in 30 male and 30 female individuals. The result showed that, the infected male and female were 24 and 12 respectively.

采用RACE和RT-PCR对白蜡虫雌成虫β1-微管蛋白基因进行了克隆,获得的cDNA全长序列为1 492 bp,完整开放阅读框为1 341 bp,编码447个氨基酸残基,包含β微管蛋白的保守区域和GTP结合位点,理论分子量约为50.20 Kda,等电点为4.75。同源性分析表明:所获得的β1-微管蛋白与其它昆虫的β微管蛋白基因在氨基酸水平上是高度同源的,该基因cDNA序列已经递交到Genbank,获得的登录号为JF731244。

白蜡虫脂酰辅酶A还原酶（FAR1）参与了体表蜡泌物的形成过程，为了进一步研究FAR1的功能，通过预测分析基因 far1 编码的蛋白结构，选取亲水性强、特异性好的一段合成多肽作为抗原肽，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并以BCA蛋白浓度试剂盒测定抗体浓度，通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色观察纯化抗体的纯度，以ELISA检测抗体效价。结果表明，纯化所得的多克隆抗体纯度高，抗体浓度0.7 mg·mL-1，抗体效价为 1：512 000，为后续FAR基因功能的研究奠定基础。

[目的] 蛹期对于白蜡虫雄虫发育和交配具有重要意义,但目前缺乏对于白蜡虫真蛹基因转录情况的分析,本研究旨在获得白蜡虫真蛹转录组数据,了解其转录组特征。[方法] 采用Illumina HiSeq 2000进行高通量测序,并进行生物信息学分析;采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测3个热激蛋白基因(hsp)在不同虫态中的表达动态。[结果] 共获得63957条unigene、63272个开放阅读框(ORF)、9561个SSR分子标记,unigene平均长度674 bp,共有14327条unigene获得了注释,Gene Ontology(GO)注释和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)注释分析表明,很多基因参与的功能与白蜡虫蛹期的生理特征吻合。[结论] 该转录组数据为白蜡虫基因功能鉴定和蛋白组学分析研究奠定了数据基础。